廣州輝駿生物科技股份有限公司

一、腺病毒服務(wù)簡介腺病毒(adenovirus)是一種無包膜的線狀雙鏈DNA病毒。它的宿主范圍很廣，既可感染分裂細胞，又可感染非分裂細胞。腺病毒在感染宿主細胞時，病毒基因組及其攜帶的外源基因獨立于宿主基因組外游離表達，因此無插入突變性，安全性更高。腺病毒載體的外源基因裝載量較大、表達速度快，產(chǎn)生的病毒滴度高，因此已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和基因治療中。輝駿生物使用的腺病毒包裝系統(tǒng)包括一個穿梭質(zhì)粒和一個輔助質(zhì)粒，攜帶外源基因的穿梭質(zhì)粒與含有腺病毒基因組(E1/E3缺失)的輔助質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染包裝細胞后，利用Cre-loxP重組酶切割系統(tǒng)，即可產(chǎn)生攜帶外源基因的非復(fù)制型重組腺病毒，重組效率大大提高。包裝出的腺病毒液可直接感染宿主細胞，介導(dǎo)外源基因的瞬時、高效表達。輝駿生物的腺病毒載體包含多種熒光標簽(如GFP或RFP等)、多種抗性篩選標簽和多種啟動子，可充分滿足客戶不同實驗設(shè)計的要求。 二、腺病毒表達系統(tǒng)的特點1>病毒基因不整合到染色體中，而是游離于宿主細胞染色體外瞬時表達，無插入致突變性；2>有廣泛的宿主范圍，對分裂期和非分裂期細胞均有感染作用；3>不需要轉(zhuǎn)染試劑，操作簡便，轉(zhuǎn)染效率極高；4>外源基因裝載容量大，可插入高達8kb的外源基因片段；5>能同時表達多個基因，可以將含有兩個基因的雙表達盒插入腺病毒轉(zhuǎn)移載體中，或者用不同的重組病毒共轉(zhuǎn)染目的細胞株來分別表達一個蛋白；6>病毒感染后，外源蛋白表達快，實驗周期短。 三、腺病毒技術(shù)整體流程A.腺病毒載體的構(gòu)建：根據(jù)客戶的不同需要，將目的基因片段連接至腺病毒穿梭載體；B.腺病毒包裝：腺病毒穿梭質(zhì)粒與輔助質(zhì)粒一起轉(zhuǎn)染293細胞進行包裝；收集富含腺病毒顆粒的細胞上清液，濃縮后進行滴度測試，得到滴度≥1×10⁸ e8pfu/ml的腺病毒液；                                                                圖1腺病毒技術(shù)服務(wù)整體流程四、腺病毒穿梭載體元件       在腺病毒的包裝系統(tǒng)中，腺病毒基因組質(zhì)粒負責(zé)攜帶腺病毒的大部分骨架元件，穿梭質(zhì)粒負責(zé)攜帶外源基因表達盒。兩者共轉(zhuǎn)染包裝細胞后發(fā)生同源重組，攜帶外源基因的病毒基因組被包裝，產(chǎn)生重組的腺病毒顆粒。輝駿生物提供的穿梭質(zhì)?？梢圆迦攵喾N不同的外源基因表達盒，具體元件如下所示，除此之外，客戶還可以根據(jù)需要更換啟動子、熒光基因或抗性基因。                                                                                          圖2腺病毒載體元件示意圖 五、腺病毒技術(shù)服務(wù)項目表1 腺病毒服務(wù)項目及內(nèi)容分類服務(wù)編號項目名稱客戶提供服務(wù)描述基因過表達腺病毒服務(wù)FG201基因過表達腺病毒載體構(gòu)建目標基因的模板構(gòu)建載體FG202基因過表達腺病毒包裝套餐目標基因的模板(1)構(gòu)建載體(2)腺病毒包裝microRNA腺病毒服務(wù)FG211microRNA過表達載體構(gòu)建microRNA前體或初始產(chǎn)物模板構(gòu)建載體FG212microRNA過表達腺病毒包裝套餐microRNA前體或初始產(chǎn)物模板(1)構(gòu)建載體(2)腺病毒包裝RNAi腺病毒服務(wù)FG221RNAi腺病毒載體構(gòu)建目標基因登錄號或序列(1)設(shè)計并合成1條干擾序列(2)構(gòu)建載體FG222RNAi腺病毒包裝套餐A目標基因登錄號或序列(1)設(shè)計并合成3條干擾序列(保證至少有1個靶序列的干擾效率大于70%)(2)分別構(gòu)建3條載體(3)分別進行3次腺病毒包裝FG223RNAi腺病毒包裝套餐B設(shè)計好的有效靶點序列(1)構(gòu)建載體(2)腺病毒包裝注: 可提供多條干擾序列特別提醒：（1）基因過表達腺病毒服務(wù)適用于目標基因長度為4000bp以下的片段，4000bp以上的請具體咨詢；（2）我公司亦可進行基因釣取和WB檢測服務(wù)，但費用不包含在總套餐之內(nèi)，需根據(jù)實際情況收費；（3）客戶如對所需病毒量及病毒液滴度范圍有特殊要求需提前告知，我公司一般提供的病毒滴度在1×10¹¹~1×10¹³ vp之間，規(guī)格為1mL；（4）若實驗材料為原代細胞和需要特殊培養(yǎng)的細胞，請具體咨詢；（5）客戶亦可根據(jù)特殊要求進行腺病毒產(chǎn)品定制服務(wù)。 六、實驗結(jié)果提交實驗結(jié)束后，我公司會提交完整的實驗結(jié)果，包括：1.客戶定制的相應(yīng)載體或病毒液；2.腺病毒液滴度測定報告單；3.腺病毒載體的測序結(jié)果和峰圖、引物序列、載體圖譜；4.全部實驗圖片；5.詳細實驗報告。 七、實驗周期及收費標準：咨詢本公司