一、原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物鏈霉素將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗鏈霉素抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物鏈霉素的含量成負相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物鏈霉素的含量。
二、試劑盒特性
試劑盒靈敏度: 0.5ppb
樣本檢測下限
雞肉、雞肝、牛奶—————————————20ppb
蜂 蜜/蜂王漿— —— — —— — —— —————10ppb
交叉反應(yīng)率
鏈霉素 — — —— —— — — — — —— — — 100%
雙氫鏈霉素 ——————— —— — — —— —108%
卡拉霉素 —— — — — — — — — — — — — — < 1%
慶大霉素 — — —— — — — — — — — —— — < 1%
回收率
牛 奶— —— —— —— —— —— —— —95±15%
雞肉組織— —— —— —— —— —— —— —85±10%
蜂蜜/蜂王漿 — —— —— —— —— —— —75±15%
三、試劑盒組成
1、 微量測試孔:每條8孔,一板12條
2、 標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶:(1ml/瓶)0ppb、0.5ppb、1.5ppb、4.5ppb、13.5ppb、40.5ppb
3、 酶標(biāo)記物 7ml ……………… 紅色帽
4、 抗體工作液 7ml ……………… 藍色帽
5、 底物液 A液 7ml ……………… 白色帽
6、 底物液 B液 7ml ……………… 黑色帽
7、 終止液 7ml ……………… 黃色帽
8、20×濃縮洗滌液 40ml ……………… 白明帽
9、10×濃縮復(fù)溶液 50ml ……………… 透明帽
四、所用儀器、試劑
具備的儀器:微孔板、酶標(biāo)儀、勻質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)
微量移液器:單道 20ul~200ul、100ul~1000ul多道 250 ul
試 劑:濃磷酸、氫氧化鈉、Na2HPO4?12H2O、NaH2PO4?2H2O、正己烷
五、樣本前處理步驟
樣本處理前須知
處理任何樣本時,都必須注意:
(a)實驗中必須使用一次性吸頭,在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
(b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進行清潔,以避免污染干擾實驗結(jié)果。
樣本前處理需配制:
配液1、將濃縮復(fù)溶液用去離子水按1:9稀釋(1份濃縮復(fù)溶液+9份去離子水)。
配液2、0.05M PB溶液
13.0gNa2HPO4?12H2O+2.2gNaH2PO4?2H2O加去離子水定溶至1L。
配液3、0.04M磷酸溶液
1ml濃磷酸加去離子水定溶至360ml。
配液4、1M NaOH溶液
稱取4g NaOH加去離子水定溶至100ml。
(a)牛奶樣本的處理方法
1、 取牛奶1ml,按1:39稀釋,混合30s。(50 ul牛奶+1950 ul稀釋后的復(fù)溶液)
2、 取50ul用于分析。
稀釋倍數(shù):40
(b)雞肉、雞肝樣本的處理方法
1、 取2±0.05g去除脂肪的勻漿樣本與8ml 0.05MPB緩沖液混合5min,置56℃水浴環(huán)境放置30min;
2、 室溫4000r/min以上,離心10min;
3、 取1ml上清液加入1ml正己烷,充分混勻,室溫4000r/min以上,離心5min
4、 去上層液體取50ul下層液,加入450ul&nbs
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