1. 測(cè)定原理
氯丙嗪檢測(cè)試劑盒是利用免疫學(xué)直接競(jìng)爭(zhēng)法的原理,固相載體微孔板上包被有氯丙嗪蛋白偶聯(lián)物,加入待測(cè)氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液及氯丙嗪的抗體,包被在微孔板上的氯丙嗪蛋白偶聯(lián)物和標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中的氯丙嗪競(jìng)爭(zhēng)性地與抗體結(jié)合,形成抗原抗體復(fù)合物;洗滌后再加入二抗,洗滌后加入顯色劑,將無色的顯色劑轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的產(chǎn)物;加入反應(yīng)終止液后使顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色;在450nm波長進(jìn)行檢測(cè),樣品中的氯丙嗪濃度與吸收光強(qiáng)度成反比。
2. 試劑盒組成
(1)96孔酶標(biāo)板: 1塊 96 T/8孔
(2)標(biāo)準(zhǔn)品: 0 ppb、0.1 ppb、0.3 ppb、0.9 ppb、2.7 ppb、8.1ppb(1mL/瓶)
(3)抗體工作液: 1瓶(7mL)
(3) 酶標(biāo)記物: 1瓶(12mL)
(4)底物緩沖液: 1瓶(7mL)
(5)底物液: 1瓶(7mL)
(6)終止液: 1瓶(7mL)
(7)20倍濃縮洗滌液: 1瓶(50mL), 加蒸餾水稀釋到1000 mL
(8)復(fù)溶液(濃縮): 1瓶(15ml),加蒸餾水稀釋至300ml
(9)使用說明書 1 份
(10)封板膜: 2張
(11)封口袋: 1 個(gè)
3. 注意事項(xiàng)
(1)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
(2)不要使用過了有效日期的氯丙嗪檢測(cè)試劑盒,不同批次、不同試劑盒之間的試劑等內(nèi)容不可混用,以免降低靈敏度。
(3)0標(biāo)準(zhǔn)品的A450nm<0.6時(shí),表示試劑可能變質(zhì),請(qǐng)勿使用。
(4)顯色劑變藍(lán),表明已變質(zhì),請(qǐng)勿使用。
4. 儲(chǔ)存條件
(1) 2-8℃保存,切勿冷凍。
(2)將不用的酶標(biāo)板放進(jìn)帶干燥劑的封口袋中密封保存。
(3) 酶標(biāo)記物和顯色液對(duì)光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
5. 樣品處理
(1) 尿樣
取新鮮干凈的尿樣50 μL進(jìn)行分析。
(2)組織、肌肉樣品 (稀釋倍數(shù)為1)
a.取1g±0.05 g組織,加入6 mL乙腈,振蕩10 min,室溫4000 r/min以上離心10 min;
b.取全部上清置于離心管中;在殘?jiān)性偌尤?ml乙腈,振蕩10 min,室溫4000 r/min以上離心10min。
c.混合兩次上清液,振蕩1min,于50 ℃下氮?dú)饣蚴覝叵麓碉L(fēng)機(jī)吹干;
d.加入1 mL配好的復(fù)溶液,取50 μL進(jìn)行分析。
6. 免疫分析時(shí)試劑的準(zhǔn)備
(1) 注意事項(xiàng)
a) 使用之前將所有試劑回升至室溫。
b) 使用之后立即將所有試劑放回2-8℃。
c) 在使用中不要讓微孔干燥。
d) 在EIA分析中的重復(fù)性,很大程度上取決于洗板的一致性,仔細(xì)按照推薦的洗板順序操作是EIA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。
e) 在所有恒溫孵育過程中,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。
(2) 濃縮洗滌液使用前應(yīng)根據(jù)所需量進(jìn)行20倍稀釋,即按1 mL濃縮洗滌液加入19 mL蒸餾水的比例進(jìn)行稀釋。
(3) 復(fù)溶液為濃縮溶液,使用前應(yīng)根據(jù)需要量進(jìn)行20倍稀釋,即按1 mL濃縮洗滌液加入19 mL蒸餾水的比例進(jìn)行稀釋。
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