【產(chǎn)品名稱】
通用名:豬圓環(huán)病毒Ⅱ型IgG抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名:Diagnostic Kit for Antibodies to Porcinecircovirus (ELISA)
【包裝規(guī)格】 96T/盒
【預期用途】
本試劑盒用于檢測豬血清中豬圓環(huán)病毒抗體。評估豬場豬圓環(huán)苗免疫狀況,感染豬的血清學診斷。
【原 理】
本試劑盒系由預包被豬圓環(huán)病毒Ⅱ型(PCVⅡ)CAP重組蛋白的微孔板和酶標記二抗及其他配套試劑組成,應用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測豬血清或血漿中豬圓環(huán)病毒Ⅱ型特異性抗體。實驗時,在包被板中加入對照血清和稀釋的待檢血清,經(jīng)溫育后,若樣品中含有豬圓環(huán)病毒Ⅱ型的特異性抗體,則將與包被板上抗原結合,經(jīng)洗滌除去未結合的抗體和其他成分后;再加入酶標二抗,與包被板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合;再經(jīng)洗滌除去未結合的酶結合物,在孔中加TMB底物液,與酶反應形成藍色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關;加入終止液終止反應后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值,即可知樣品是否含有特異性抗體。
【試劑盒組成】
1. 豬圓環(huán)病毒Ⅱ型抗原預包被微孔板條 96T×1
2. 酶標記物 (紅蓋) 11ml×1
3. 樣品稀釋液 (黃蓋) 25ml×1
4. 20X濃縮洗滌液 (透明蓋) 20ml×1
5. 底物液A (白蓋) 6ml×1
6. 底物液B (黑蓋) 6ml×1
7. 終止液 (黃蓋) 6ml×1
8. 陽性對照 (紅蓋,已滅活) 0.5ml×1
9. 陰性對照 (綠蓋,已滅活) 0.5ml×1
10. 蓋板膜 1張
11. 自封袋 1個
12. 說明書 1份
【樣品制備】 取動物全血,按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品短期可于2~8℃保存,長期需置-20℃保存。
【樣品稀釋】 用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋(如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中,混勻)。陰、陽性對照不用稀釋。
【洗滌液配制】濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫(25℃左右),并搖動使沉淀的鹽溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
【試驗操作方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復至室溫。
2.取所需用量包被微孔板條,設空白、陰性及陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.陰性、陽性對照孔分別加入陰性、陽性對照血清100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的血清樣本100μl;空白對照孔不加。
4.混勻,置37℃反應30分鐘。
5.扣去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復洗滌5次,拍干。
6.每孔加酶標記物100μl(空白孔除外)。置37℃反應30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔依次加顯色劑A、顯色劑B各50μl,混勻,37℃避光反應10分鐘。
9.每孔加終止液50μl,混勻,用空白孔調(diào)零,于450nm(630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A450)。
【結果判定】
定義:N=陰性對照孔平均A值;P=陽性對照孔平均A值;S=樣品孔A值;S/P=樣品孔A值/陽性對照孔平均A值。
1.正常情況下,N≤0.10,P≥0.50。
2.S/P≥0.18時判為陽性,S/P<0.15時判為陰性,0.15≤S/P<0.18時判為可疑。
當本實驗結果為陰性或可疑時表明豬只抗體水平不足,建議補打相應疫苗。
【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性檢測豬圓環(huán)病毒Ⅱ型IgG抗體。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣,嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性,應避免接觸皮膚和衣物,如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應恢復至室溫方可開袋,未用完的微孔板需放入有干燥劑的密封袋中保存(包被板開封后請于2~8℃避光保存,使用期限為1個月)
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶,使用時需恢復至室溫以
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